在 GMP 驗證的世界中，一個問題一再出現(xiàn)：我們是否應該像繪制溫度分布圖一樣繪制恒溫箱中的二氧化碳濃度分布圖？在最近的二氧化碳恒溫箱：精確控制和可靠監(jiān)測網(wǎng)絡研討會上，我們再一次被問及這個問題。

為什么溫度分布圖有所不同

溫度分布圖是 GMP 中常見的要求。我們通過測量氣溫來間接反映產(chǎn)品溫度。由于產(chǎn)品不會立即與周圍空氣中的變化達到平衡，因此繪制分布圖有助于證明其均勻性和穩(wěn)定性。相對濕度也因溫度而異，因此繪制分布圖也很重要。

但二氧化碳氣體的行為有所不同。

二氧化碳分布的物理學

與溫度和相對濕度不同，氣體平衡得非?？?。除非探頭直接位于氣體入口前方，否則腔室中的二氧化碳幾乎會立即擴散?，F(xiàn)代恒溫箱通常使用風扇來保持溫度均勻性，這也加速了二氧化碳的混合。

我從事 GMP 驗證和環(huán)境監(jiān)測工作已有二十多年。在這段時間里，我經(jīng)常用這個比喻來解釋二氧化碳的平衡：它類似于水箱中的水。您不需要驗證水面是否水平；由于重力作用，水面本質(zhì)上就是水平的。同樣，由于氣體的固有行為，二氧化碳濃度在幾秒鐘內(nèi)就會在整個恒溫箱中穩(wěn)定下來。

與我合作過的一些客戶提出了一個重要觀點：盡管恒溫箱制造商聲稱具有“快速擴散"和“均勻的二氧化碳分布"，但在 GMP 環(huán)境中，僅憑供應商的聲明是不夠的，即使這些聲明是真實的。驗證團隊必須提供書面證據(jù)，證明恒溫箱適用于其預定用途。

緩沖效應

即使打開門，二氧化碳濃度從典型的 5% 目標下降到環(huán)境濃度 (~0.04%)，培養(yǎng)皿和燒瓶內(nèi)的液體培養(yǎng)基也可起到緩沖作用。溶解的二氧化碳不會立即逸出。這種緩沖作用有助于在短暫開門時保護細胞培養(yǎng)物，就像打開冰箱門時冷凍產(chǎn)品不會立即在冰箱中解凍一樣。在驗證中，這意味著開門后的恢復率可能是一個比在腔室內(nèi)多個點繪制二氧化碳分布圖更有意義的參數(shù)。 

審核人員期望什么結(jié)果？

挑戰(zhàn)就在這里：沒有正式的監(jiān)管指導要求繪制恒溫箱中的二氧化碳分布圖。USP、WHO 和 ISPE 提供了溫度分布圖方面的指導，但沒有提供二氧化碳分布圖方面的指導。

但這并不意味著審核人員不會提出問題。我們從經(jīng)驗中得知，監(jiān)管機構(gòu)可能會要求提供書面證據(jù)，證明恒溫箱“處于受控狀態(tài)"且“符合預期用途"。但是，通常不會要求提供二氧化碳分布圖。相反，我們的注意力最好集中在證明恒溫箱能夠按預期工作，而不是僅僅依賴于供應商的設計聲明。

我的觀點相當務實：

•   監(jiān)測和控制二氧化碳至關重要。

•   分布圖不太可能揭示有意義的變化趨勢。

•   二氧化碳恢復率和穩(wěn)定性的證據(jù)可能比分布圖研究更有說服力。

驗證團隊的關鍵要點

•   二氧化碳快速平衡：與溫度不同，分布圖通常不會顯示變化趨勢。

•   緩沖作用保護培養(yǎng)物：液體培養(yǎng)基中溶解的二氧化碳可在短暫開門時增加穩(wěn)定性。

•   關注恢復率：驗證應強調(diào)二氧化碳濃度水平在干擾后恢復到設置點的速度。

•   文檔控制：即使沒有分布圖，驗證數(shù)據(jù)也應證明受控狀態(tài)和適用性。

•   準備好回答審核人員的問題：聲明必須經(jīng)過內(nèi)部驗證，而不僅僅是依賴制造商手冊。

結(jié)論

雖然繪制恒溫箱中的二氧化碳分布圖可能并非必要，也可能并無科學意義，但對二氧化碳控制的驗證絕對是必須的。通過關注恢復率、穩(wěn)定性和監(jiān)測記錄，驗證團隊可以滿足監(jiān)管期望，同時尊重二氧化碳行為的獨特物理特性。 

我曾經(jīng)對一位客戶說過這樣一段俏皮話：“您可以成為第一個繪制二氧化碳分布圖的人，并證明它沒有任何作用?；蛘吣赡転?GxP 開啟一項全新業(yè)務。"無論如何，對于任何在 GMP 下使用細胞恒溫箱的實驗室來說，這個對話都很重要。